紫外可见分光光度计含量测定方法-上海奥析UV1800PC

IgG含暈测定法

(紫外可见分光光度计含量测定方法-上海奥析UV1800PC紫外-可见分光光度法）

本法系依据免疫球蛋白G (IgG) 与相应的抗体特异

性结合后，在适宜的电解质、温度、p H 条件下，产生凝

集反应，形成抗原-抗体复合物，根据供试品的吸光度求

出供试品中I g G的含量。

试剂 （1 )缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷（Tris)

12. 42 g ,氯化钠9g、聚乙二醇6000 50g、牛血淸白蛋白

(BSA) lg、（NaN3) l g ,加水溶解，用l.Omol/L

盐酸调p H 值至7. 4，加水稀释至1000ml。

( 2 )抗人I g G血清按说明书要求将冻干抗人IgG血

清复溶，按标示效价取一定量抗人I g G血清，加缓冲液稀

释至抗体zui终效价为1 : 4 (例如抗人I g G血清效价为1 ••

100，量取原液2 m l加抗体缓冲液48ml)，充分混匀，

0.45卩!11膜过滤。4°C保存备用。

IgG标准品溶液的制备用将I g G标

准品在每l m l含0.2?6 . 0 m g范围内做适当的系列稀释

(通常做5个稀释度）。

供试品溶液的制备用将供试品稀释

成高、中、低3 个稀释度，其I gG含量均应在标准曲线范

围内。测定法取供试品溶液1(^1，加人已预热至37°C的

抗体液l m l ,混匀，每个稀释度做2 管，置37°C水浴中保

温1小时，充分混匀，照紫外-可见分光光度法（通则

0401)，在波长3 4 0 n m处分别测定吸光度。

用I g G标准品溶液10M1替代供试品溶液，同法

操作。

计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均

值。以标准品溶液的I gG含量的对数对其相应的吸光度的

对数作直线回归，求得直线回归方程，相关系数应不低于

0.99；然后将供试品溶液吸光度的对数值代人直线回归方

程，求得值的反对数，再乘以稀释倍数，求取每lml供试

品溶液I gG含量，再由供试品各稀释度I g G含量求平均

值，即为供试品I gG含量（g/L) 。

【附注】（1 ) 全部反应管必须在1 0分钟内测量完毕。

( 2 )设置紫外分光光度计狭缝宽度（Slit Width)

为 2 n m 0

( 3 )每次测定可根据供试品I gG含量，适当调整标准

品溶液中I gG含量范围。